应用MVR-PCR和银染法分析河北汉族人群D1S8基因座DNA结构多态性

忸哥皿薄翮谁蚌J)，L中国法医学杂志1999年第14卷第4期f一{{b应用MVR—PCR和银论著染法分析河北汉族人群D1S8基因座DNA结构多态性河北王科大学(石隶庄050017)法匡学教研室分子生物学研究室丛斌左敏姚玉尤红煜郭晓青张国忠彭郁葱谷振勇王俊霞}摘要研究D1S8基固座重复序列内部的变异，井进行数字编码。应用MVR—PCR和聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳银染法对240名河北汉人无关个体进行检测。结果每个个体得到约30个数字编码，未发现任何两无关个体所有编码相同，30个编码完全相同的概率为355×10。’。3种重复单位a一型、r'型、o_型出现的频率分别为54．77％、42．54％、2．69％。为小卫星变异重复序列的研究及其在法医实践中的应用提供了一种新方法。煳词小卫制i。j}，StudyO11po／ymorphismatD1S8locusin。ItebeiRanpopulationusingMVR-PCRandsilverstaining／GongBin，GuoXiaoqing，GuZhenyong，eta1．／DepartmentofForen—sicMedicine，HebeiMedicalUniversity．Shijiazhuang050017AbstractForthep“耳ofstudyingtheminisatellitevariantrepeat(MVR)se—queneesatDIS8locusandobtainingdigitalcodes，240unrelatedindividualsinHebeiHanpopulationWel~edetectedbyusingMVR—PCRandpolyacrylamidegradientgeleleetrophoresisfollowedbysilverstainingTheresultdemonstratedthatthereareabout3Odigitalmdesob—rainedNoneoftwounrelatedindividualshadthesamecode．Theprobabilityofidentityof30digitalcodeswas3．55×10—11．Thepercentage0fthreerepeaturuts，a-type，t-typeandc~typewas54．77％，42．54％，2．69％respectively．Thisapproachprovidesanewmethodfortheresearchofminisatellitevariantrepeatanditsapplicationtof0rensicsciencepractice．KeywordsForensicscienceD1S8locusMinisotellitecariantrepeatDigitalcodeIndividualidemificatidon位于人类1号染色体长臂(1q42．43)的D1S8基因座(探针MS32)是由长度为29bp的重复单位串联构成的小卫星DNA．其中约50％的重复单位5端第2个碱基存在G—A的碱基转换，导致一个Hae—m限制性酶切位点的丢失“】。因此可将重复单位分为Hae—nl和Hae．m一两型．前者称为a．型，后者称为t一型。a一型和t型两种重复单位在等位基因内部随机出现．使D1S8基因座不仅存在核心序列重复数目的不同．还存在重复单位结构的变异．表现出高度的多态性，称为小卫星变异重复序列(minisatellitevariantreat，MVR)。本研究利用PCR技术分别扩增出a一型和t一型两种重复单位，再采用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳及银染法对河北汉族人群DlS8基因座进行快速检测，得到基因组DNAD1S8基因座的数字编码。旨在为构建DNA指纹数据库及法医物证检案提供理论依据及简便、快速、经济、准确193维普资讯http://www.cqvip.com的新方法。1材料与方法1．1材料1．1，1样本240僻河北汉人无关个体的枸橡酸钠抗凝血(河北省血渣中心提供)；10个家系30人份抗凝血(河北省人民医院儿科提供)。1．1．2引物4种引物序列见文献[2】，由中国科学院微生物研究所合成。1．2方法1．2．1DNA提取无酚法提取DNA。取全血250p．1，加500~1灭菌双蒸水混匀，10000r／rain离心20rain，弃上清；加5o00．1％NP一40混匀井离心(10000r／rain，20rain)。弃上清；加500~1裂解液(1Ommol／LTri~HC]，pH8．2，0．4mmol／IEDTA．0．5％SDS)及6．25tA蛋白酶K(1Omg／m1)混匀．55C孵育1h；加125~d饱和NaCI，离心(10000r／rain，