云南白族人群Y染色体DYF155S1基因座多态性研究

第23卷第3期2004年8月人类学学报ACTAAN删R0POIDGICASINICAVo1．23．No．3Aug．，2OO4云南白族人群Y染色体DYF155S1基因座多态性研究黄艳梅，伍新尧，蔡贵庆，童大跃，区敬华，曾艳红(1．中山大学中山医学院法医系，广州510089)摘要：揭示云南白族136例无关男性个体Y染色体小卫星DYFI55SI基因座多态性。用已建立的Amp*FLP和MVR．PCR方法分析DYFI55SI基因座长度多态性、5端多态性、3端多态性。DYFI55SI基因座具有高度多态性，基因多样性(h)达0．9996。研究表明将Amp*FLP和荧光MVR．PCR结合起来更能充分揭示DYFI55SI基因座多态性。可为遗传学、人类学及法医学的研究提供有效的工具和基础资料。关键词：DYFI55SI；MVR．PCR；Y染色体；人类学；遗传学中图分类号：Q987文献标识码：A文章编号：1000．3193(2004)03．0239．091998年JoblingMA等⋯报道Y染色体特异的小卫星基因座DYF155S1，由重复48一ll4次的核心序列串联排列构成，核心序列大小为25bp，且存在变异。目前研究发现DYF155S1基因座的多态性可由长度多态性、5’端多态性和3’端多态性三部分组成u。DYFI55SI以其高度多态性、男性特有、呈男性伴性遗传等特点而成为突变研究及追溯人类父系发展的一个很好的遗传标记¨。本文在建立Amp—FLP(amplifiedfragmentlengthpolymorphism)和荧光标记MVR．PCR(minisatellitevariantrepeatbyPCR)分析技术的基础上分析了136例云南白族人群DYF155S1基因座遗传多态性，为遗传学、人类学研究及法医学应用提供有用的工具和基础资料。1材料和方法样品来源136份云南白族男性无关个体血样取自云南大理地区。模板DNA的抽提采用常规酚／氯仿抽提血液样品的基因组DNA。引物Y1A+、YlB+、TAG1和TAG4R引物序列参见文献[1]，Y1A+和YlB+引物由上海生工合成，TAG1和TAG4R引物5端标记6一FAM(6．carboxyfluorescein)荧光染料，由上海博亚公司合成。Y1A+和YlB+引物、Y1A+和TAG1引物、YlB+和TAG4R引物分别用于扩增DYF155S1基因座片段长度、5端1型核心序列排列图谱、3端4型核心序列排列图谱。Amp-FLP方法分析DYF155S1基因座PCR反应体系为20ttL，含有人类基因组DNA50一l00ng，10×缓冲液(具有Mg2)2ttL，TaqP／us酶1U，0．25mmol／LdNTP及引物各收稿日期：2003．07．Ol；定稿日期：2004．04-16基金项目：广东省自然科学基金资助项目(97．128)，中山医科大学“211工程”重点学科建设课题基金资助项目(42O9OO8)作者简介：黄艳梅(1971一)，女，汉族，河南新乡人，硕士研究生，讲师，现工作单位：河南新乡医学院基础部(453ooo)通讯作者：伍新尧，Tel：020—87330557。E-maihxyaow@gzsums．edu．cn维普资讯http://www.cqvip.com·240·人类学学报23卷1“mol／L。样品混合后置Eppendorf-PCR仪热循环：95℃1min，66~C3．5min，循环30次，72~C延伸10min；扩增产物取3于6％非变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离PCR产物，银染显色。荧光标记MVR-PCR方法分析DYF155S1基因座5端序列PCR反应体系为10含有基因组DNA50—1o0ng，TaqP／us酶0．5U，10×缓冲液(具有MS)1／xL，0．25mmol／LdNTP及引物Y1A+、TAG1各l~mol／L，样品混合后置Eppendorf-PCR仪，热循环条件及PCR产物分析方法同文献[4]。荧光标记MVR-PCR方法分析DYF155S1基因座3端序列PCR反应条件及检测方法同参考文献[7]。计算基因多样性(genediversity)：h=n(1一>)／(n一1)rt表示样本数，为群体中每一种等位基因的频率。2结果2．1不同方法分析DYF155S1基因座多态性DYF155S1基因座扩增片段长度多态性用DYF155S1两翼保守区引物(YlA+和YlB+)进行PCR扩增，可扩增出DYF155S1和DYF155S2两个片段。DYF155S1在云南白族男性群体中表现出长度多态性，大小约为1330-2505bp，云南白族136例无关男性个体共检出38个不同长度的片段；本方法揭示的基因多样性(h)为0．9698。小片段DYF155S2表现为有或缺失而呈现二态现象，136例男性中有2例表现小片段缺失，缺