嗜盐小盒菌属新种的鉴定

∞。嗜盐小盒菌属新种的鉴定~TqO]周培瑾徐瓠／肖昌松马允娜刘宏迪呻酣彻⋯．摘要从新疆盐湖分离纯化到3株多形态嗜盐菌(编号为A，B2和B-B)。以《伯杰氏系统细／菌学鉴定手册》第3卷(1989年)为主要依据，根据极性脂分析，这3株菌可归入嗜盐小盒菌属(Haloarcuta)。叉根据细胞形态特征和生理生化特性，这3株菌不同于该属中现在正式承认的两个种而成为一独立的类群，建议为嗜盐小盒菌属中的一个新种，命名为艾丁嗜盐小盒菌([-Ialoarculaaidinen~issp．nov关键词嗜盐菌．嗜盐小盒菌属，)。以A菌株作为模式株。脂，钟，红在1984年出版的《伯杰氏系统细菌学鉴定手册》中“]，极端嗜盐菌仅为一科二属：嗜盐杆菌属(Halobacterium)和嗜盐球菌属(Halococcus)。其分类主要依据它们的生理生化指标。这种原始的传统分类方法与嗜盐菌研究的发展不相适应。自从Tindall[2发现了嗜盐嗜碱菌的类型，人们才开始重新对嗜盐菌的分类有一新的估价，即嗜盐菌的分类应建立在化学分类的基础上，而不是以生化反应为主的传统观念口一。极性脂的组成在这方面已证明是非常重要的Torreblanca就是根据非碱性嗜盐杆菌的极性脂组成的差别，在嗜盐菌科的嗜盐杆菌中分成了3个新属，即嗜盐杆菌属、嗜盐小盒菌属(Haloarcula)和嗜盐富饶菌属(Haloferax)。本文就是在此基础上，鉴定出嗜盐小盒菌属的一个新成员。1材料和方法1．1菌株来源A菌株系从新疆吐鲁蕃艾丁湖分离得到；B。和B-B菌株系从新疆鄯善县乌宗布那克盐湖分离得到；HalobacteriumcutirubrumNRC34001(6)来自加拿大；Haloarc“lavallismortisATCC29715(EM201)、Haloarculahispam'caATCC33960(EM202)和HaloarculamarismortuiATCC43049(EM203)来自美国。1．2培弊条件和分析方法生长培养基为CM培养基，培养温度37C。鉴定主要以《伯杰氏系统细菌学鉴定手册》第3卷(1989年)【6为基础。1．2．1个体形态：用革兰氏染色、相差显微镜观察活细胞、电镜观察、鞭毛染色等方法确定个体形态。国家自然科学基金重点课题资叻项日本丈于1992年5I}j26日收到。维普资讯http://www.cqvip.com微生物学报34卷1．2．2菌落形态：牛奶盐琼脂平板划线一，37℃光照培养。I．2．3细胞生长测定：液体培养一定时间，取样，稀释10倍，在460nm处测定OD值1．2．4细胞色素测定0：收集细胞，甲醇丙酮(1：1)抽提，DU一7分光光度计扫描测其吸收峰1．2．5甘油二醚测定0：用薄板层析法以E．coli和HalobⅡcteri“mc“tirubrumNRC34001作对照测定甘油二醚带。1．2．6细胞蛋白特性：用薄层等电聚焦法【测定细胞蛋白的酸碱性。1．2．7其他生理生化反应：参照Ross的方法。1．28DNAG+cmol含量的删定：用紫外分光光度法测定T值。1-2．9PCR和DNA杂交：按参考文献[13]的方法。2结果2．1形态特性2．1-1个体形态：As、Bz和B一菌株均为革兰氏阴性菌，细胞为片状的多形态，从三角形、方形，多角形到圆盘形等(以液体培养的幼龄细胞为准)。即使固体培养基上的老龄菌也未观察到杆状菌。这三株菌均未发现鞭毛。细胞大小约1-3p．m([~1)。囤lAs菌株的电子显傲镜照片(30000×)Fig-1ELectronicmicrographsofstrainA2-1·2菌落形态：菌落表面光滑湿润，牯稠，红色，其直径约为lmm(培养7天，37C)。2．2生长曲线、嗜盐度以及Mg：一和Na对生长的影响这3株菌的生长曲线图形基本相同(图2)。细胞量达到最高时的生长时间均约为80小时，倍增时间约为l2l3小时。3株菌的嗜盐范围因环境不同有很大差别，一般为lo一3o，最适范围在l2．5一维普资讯http://www.cqvip.com2期周培瑾等：嗜盐小盒菌属新种的鉴定20。Mg+对这3株菌的嗜盐度有很大影响。即在一定范围内，Mg可以部分取代Na。从图3，4中可以看出，当Mg浓度为2时，生长NaCI浓度范围约为15—30，最适生长NaC1浓度为2o；当Mg随Na一浓度下降而等摩尔浓度增补时，最适生长的NaCI浓度从20降至15(此时MgSO·7HO浓度为17)，适合生长的NaC1浓度范围也有所扩大2．3生理生化特性生理生化试验结果见表1。这3株菌的生理生化特性基本相似，但与嗜盐小盒菌属的典型成员有些差别。表1嗜盐小盘菌属的生化特性比较Table1Comparisionsofbiochemical[eatur~s0fHal~rcula特性EM201EM202E