含油 废水 中一株高效油脂降解菌的筛选和鉴定

生态环境学报2010,19(6):1378-1382http://www.jeesci.comEcologyandEnvironmentalSciencesE-mail:editor@jeesci.com基金项目：山东省908专项(SD908-01-01-05：06)；国家高技术研究发展计划(863)项目(2007AA09Z416)；中国海洋大学研究训练计划(OUC-SRTP)资助项目(0811010504)作者简介：游偲(1987年生)，女，硕士研究生，主要从事微生物生态学方面研究。E-mail：ycst.1987@163.com*通讯作者：E-mail:xiaoh28@163.com收稿日期：2010-04-27含油废水中一株高效油脂降解菌的筛选和鉴定偲游1，朱琳1，张艳1喆，张2,1，唐学玺1，肖慧1*1.中国海洋大学海洋生命学院，山东青岛266003；2.中国水产科学研究院黄海水产研究所，山东青岛266071摘要：从中国海洋大学餐厅下水道废水中分离、筛选获得9株具有油脂降解能力的菌株。菌株ss-11油脂降解能力最强，在初始筛选条件下其降解率达47.29%。对ss-11的降解条件进行初步研究，结果表明，在初始豆油量为1.0mL·L-1，初始pH为7.5，摇床转速为140r·min-1，37℃下培养72h，该菌的油脂降解率达87.55%。通过菌落形态、生理生化特征、16SrDNA序列系统发育分析，将其鉴定为产酸克雷伯氏菌（Klebsiellaoxytoca）。关键词：油脂降解菌；产酸克雷伯氏菌；16SrDNA；系统发育分析中图分类号：X703文献标识码：A文章编号：1674-5906（2010）06-1378-05随着我国经济的迅速发展，油脂加工厂以及餐饮业排出的油脂废水量日益增多。直接排放的油脂废水会飘浮于水体表面，影响水体的复氧及其自然净化过程，危害水生生态系统，严重污染周围环境[1-2]。目前，油脂废水的处理方法主要有物理法、化学法和生物法。物理法和化学法由于投资大，占地广，流程复杂，且容易产生二次污染，实际应用较少[3]。而生物法处理油脂废水，主要利用油脂废水中的微生物具有一定的油脂降解能力，能将油脂作为碳源和能源，并通过微生物生长过程中产生的脂肪酶等降解酶系的作用将油脂水解为甘油、脂肪酸，最终分解氧化为水和二氧化碳等代谢产物[4-5]；整个处理过程投资小，成本低，效率高且无二次污染，现已成为国内外研究的热点[6-8]。我国对油脂废水的生物处理主要采用活性污泥法，然而传统使用的活性污泥对含油废水的直接处理能力较低、效果差[9]。因此从自然环境中筛选高效油脂降解菌，采用投菌法对活性污泥加以改善，对处理油脂废水具有重要意义。1材料与方法1.1材料1.1.1样品来源采自中国海洋大学鱼山校区快餐厅后下水道。1.1.2培养基富集培养液：NaCl0.5g，蛋白胨5.0g，牛肉膏0.5g，豆油按周期加入，pH7.0～7.5，蒸馏水1000mL。121℃灭菌20min。中性红培养基：牛肉膏蛋白胨培养基加豆油10mL，0.6%中性红水溶液1mL。121℃灭菌20min。选择培养液：蛋白胨1.0g，NH4NO30.2g，K2HPO40.5g，KH2PO40.5g，MgSO4·7H2O0.1g，豆油1.0mL，pH7.2～7.4，蒸馏水1000mL。121℃灭菌20min。1.2方法1.2.1驯化将采集到的样品用无菌水10倍稀释后充分混合，制成样液。取5mL样液到45mL富集培养液中，30℃，140r·min-1条件下震荡培养，并同时做3个平行样。每2d观察，若油脂降解效果好则适量补加豆油。每6d为1周期，接种10mL菌液到40mL新培养液中以促进菌株的生长，驯化持续5个周期。初始加油量随周期逐次递增，分别为0.8，1.6，2.4，3.2，4.0mL·L-1。1.2.2油脂降解菌的分离从驯化样中选取油脂分解较充分的菌液，以最佳稀释浓度10-5稀释涂布于牛肉膏蛋白胨培养基上，30℃培养48h。挑选不同形态特征的菌落，划线纯化培养。1.2.3油脂降解菌的筛选将纯化后的菌株接种于中性红培养基上，观察菌落周围是否变红，若变红则表明菌株能够分解油脂产生脂肪酸[10]。将初筛入选的菌株接种到以豆油为唯一碳源的选择培养液中，30℃，140r·min-1条件下培养72h，用紫外分光光度法[11]测定样品在225nm波长下的吸光度值，同时以豆油为溶质石油醚为溶剂，测定不同豆油浓度的吸光度值，绘制标准曲线，根据标准曲线计算含油量以及各菌株的油脂降解率，选取降解率最高的菌株作进一步研究。游偲等：含油废水中一株高效油脂降解菌的筛选和鉴定13791.2.4降解特性初步研究从入选的菌种中挑取一环新鲜斜面种子，接种到不同初始pH（5.0、6.0、7.0、8.0、9.