光合细菌Ⅰ的分离及其对水体中亚硝酸盐降解的研究

第!卷第#期!$$%年#月水产科学&’()*+’*((,’*-,*./01!-/1#!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!2341!$$%光合细菌!的分离及其对水体中亚硝酸盐降解的研究刘慧玲，张红莲，李细钊（湛江海洋大学水产学院，广东湛江%!$55）摘要：从对虾养殖池的底泥中分离和筛选出光合细菌!，优化其培养条件后，用于降解养殖污水中亚硝酸盐。试验得出该菌最佳培养条件：6)为71%，碳源为乙酸钠，碳源浓度!8，接种量#9，!%:;$<，;$$$0=条件下培养%>；该菌对亚硝酸盐的去除率为7$19。关键词：光合细菌；分离；亚硝酸盐；降解中图分类号：(?#5@!!文献标识码：A文章编号：B$$;CBBBB（!$$%）$#C$$;!C$!收稿日期：!$$DBBDB!；修回日期：!$$DB!D;$1作者简介：刘慧玲（B?7#D）女，硕士研究生1随着养殖业的迅速发展，养殖密度不断增大，水质恶化也日益严重，亚硝酸盐是影响水质的关键因素之一，对养殖对象的危害主要是表现在将其血液中亚铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，导致血红蛋白失去载氧能力，从而影响机体的正常代谢。对该污染物的去除，近年来人们探索了许多方法，微生物制剂也被广泛应用于水质处理，并取得一定成效［B］。光合细菌是一类革兰氏阴性细菌，细胞内含有细菌叶绿素，在无氧和光照条件下，可利用水体中残饵及粪便等有机物，也可以利用硝酸盐或亚硝酸盐进行不产氧的光合作用，从而净化水质［!］。本试验目的是从养殖池底泥中分离筛选出一株能适应养殖环境并可迅速降解亚硝酸盐的光合细菌。B材料与方法B1B试验材料B1B1B菌种来源从湛江市湖光镇随机选择;个对虾养殖池，采虾池底泥装于无菌玻璃瓶，用于细菌的分离培养。B1B1!水样来源采对虾养殖池排污口养殖废水作为试验水样。B1!试验方法B1!1B细菌富集培养将!$$E0灭菌后的富集培养基倒入广口瓶中，与污泥搅匀，加入灭菌的液体石蜡以隔绝空气。!%:;%<，光照%$$$:B$$$$0=培养，当瓶壁上出现红色菌膜时，取菌膜处水样转接入另一装有富集培养基的广口瓶中培养，接种量为B9:!9，如此转接:%次［;］。B1!1!细菌的分离纯化用蒸馏水将富集培养的光合细菌的菌悬液稀释B$倍，取$1!E0转移至螺菌培养基平板上培养。为在培养过程中隔绝空气，先将$1%F碳酸钠和$1%F焦性没食子酸充分混合于培养皿盖内，再将已涂好菌液的平板迅速倒扣其上，最后又吸取;:E0已加热熔化的石蜡封在平板边沿，直到密不透风为止。在!$<，;$$$0=培养>后，取生长良好的红色单菌落，进一步采用划线法分离;:次，显微镜下检查无杂菌后，将其保存于液体培养基备用［］。B1!1;G(AD!的鉴定B1!1;1B形态特征观察采用活体观察、革兰氏染色和赖夫生鞭毛染色［%］等方法。B1!1;1!生理生化试验在每支装有%E0琼脂培养基的试管中加入!9的各种碳源和电子供体，灭菌后划线培养细菌。B1!1最佳培养条件的选择用药用点滴瓶装!%$E0液体培养基，根据H?（;）正交表设计试验，检验种因素对G(AD!生长的影响，%>后测定生物量（IJ值）。正交表在试验结果中列出。B1!1%亚硝酸盐对G(AD!生长的影响在含-K-I!浓度为$、$1$%、$1B$、$1%、B1$$、%1$$EFLH的富集培养基中分别接入相同量的G(AD!，培养温度为;!<，光照条件下培养;>后测生物量。B1!1#G(AD!对水体中亚硝酸盐的降解作用B1!1#1B水样处理采集虾池排污口污水BH，用滤纸过滤!次，并将6)值调至#:7后待用。B1!1#1!亚硝酸盐的降解测定先根据重氮D偶氮比色法得出亚硝酸盐标准曲线［#］，再将G(AD!以#9的量投入处理后的水样中，以未投菌的水样作为对照，试验设;个平行组，%>后测IJ值，测定前先将G(AD!以;$$$MLEN4去除，然后测定亚硝酸盐含量，并计算亚硝酸盐的平均去除率。!结果与分析!1BG(AD!的鉴定!1B1B形态特征细胞为杆状或卵球形，规格为$1#:$17E，极生鞭毛，细胞分裂方式为等二分裂或芽裂，革兰氏染色为阴性，无菌柄。!1B1!生理生化试验万方数据表!生理生化特征碳源乙酸钠乙醇酵母膏蛋白胨甘油葡萄糖#根据菌落颜色、细胞形态和主要生理生化特征结果，参照《伯杰氏细菌鉴定手册》［$］和《微生物学实验教程》［%］，推测该菌株为红假单胞菌属。&’&最佳培养条件的选择表&()（%*）正交实验表因素水平+,-./.值!0’1乙酸钠!&2’$1)&0’1乙醇&*2’*0$%0’1柠檬酸%02’0!%*$’2乙酸钠&0!’!&$1$’2乙醇%&2’$!)0$’2柠檬酸!*2’**0$$’1乙酸钠%*!’23)3$’1乙醇!02’3%