一株好氧反硝化菌的分离及特性研究

广东农业科学2012年第4期一株好氧反硝化菌的分离及特性研究高存川，谢为天，李红胜，赵春苗，徐春厚(广东海洋大学动物科学系，广东湛江524088)摘要：从土壤中分离得到一株好氧反硝化细菌F6，该菌株在好氧条件下具有反硝化能力。亚硝酸盐氮初始浓度为250,~s／L时，该菌株在48h内亚硝酸盐氮去除率为64．40％。通过形态学特征、生理生化特性及16SrDNA同源性比较对菌株F6进行鉴定，初步判断其为嗜碱副球菌(Paracoccusalcaliphilus)。关键词：好氧反硝化；亚硝酸盐；嗜碱副球菌中图分类号：X172文献标识码：A文章编号：1004—874X(2012)04—0103—02IsolationandcharacterizationofanaerobicdenitrifierGA0Cun-chuan，XIEWei-tian，LIHong-sheng，ZHAOChun—miao，XUChun—hounimalsciencedepartmentofGuangdongOceanUnwe~ity,Zhanjiang524088，China)Abstract：AnaerobicdenitrifyingbacterialstrainF6wasisolatedfromsoil．Thedenitrifyingexperimentresultsshowedthatunderaerobicconditionsthereductioneficiencywithin30hourswasupto64．40％respectivelywithinitialNO2-Nconcentrationof250mg／L．Onthebasisofitsphysiologicalandmolecularproperties，strainF6wasidentifiedasParacoccusalcaliphilus．Keywords：aerobicdenitrifieation；nitrite；Paracoccusalcaliphilus近年来．我国的水产养殖业发展迅速。然而，随着养殖业集约化程度的提高和养殖密度的增加，池塘中大量残余饵料、水产动物排泄物、死亡生物残体沉于池底，导致养殖水体中的氮素严重超标口1。研究表明，养殖水体中亚硝酸盐含量超标是水产动物发病的主要原因之一。亚硝酸盐与鱼虾体内的亚铁血红蛋白结合，形成高铁血红蛋白。使其运输氧的能力降低，导致鱼虾窒息死亡圆。目前，微生物脱氮被认为是降低水体中亚硝酸盐的有效方式。传统理论认为，水体中亚硝酸盐氮在缺氧条件下被反硝化菌还原为N：和NO。然而，在水产养殖过程中必须充氧来提高水中的溶解氧量，导致厌氧反硝化细菌不能充分发挥其脱氮作用。因此，好氧反硝化细菌对于解决这一问题具有重要意义。自Robertson等【5】于1988年首次分离出好氧反硝化菌(Paracoccuspantotropha)以来，国内外学者对其进行了大量的研究，目前已报道的反硝化菌有Alcaligenesfaecalis、ThiosphaeraPantotropha和Microvirgulaaerodenitrificans等81。本研究通过采集沿海红树林根系下的活性淤泥，利用硅胶平板从中分离鉴定出1株具有降解亚硝酸盐氮的反硝化菌株F6，并对其进行好氧反硝化活性测定，以期为其应用于水产养殖生物脱氮提供理论支持。1材料与方法1．1试验材料1．1．1反硝化培养基(DM)将酒石酸钾钠20g、KNO2收稿日期：2011—12—2l基金项目：广东省科技计划项目(2o08B02O80o007，2010B020313002)作者简介：高存川(1986一)，男，在读硕士生，E—mail：gaocunchuanl23@126．com通讯作者：徐春厚(1963一)，男，硕士，教授，E—mail：xuchunhou@l03g、K2HPO40．5g、MgSO4·7H2O0．2g、微量元素溶液2mL与蒸馏水定容至1L，pH值7．5。1．1．2硅胶平板取5．5mL相对密度为1．84的浓硫酸加入155mL的蒸馏水中，取22．0mL相对密度为1．19的浓盐酸加入185mL的蒸馏水中，两者混合即为稀酸液：称取82．59g硅酸钠(NaSiO，·9H20)加入500mL蒸馏水中，搅拌溶解即为水玻璃；分别取13mL水玻璃和7mL稀酸液于小烧杯中，快速搅匀，倒入培养皿中，静置待其凝固。将凝固后的硅胶板放入水槽中浸泡。每30min换水1次。用I％AgNO溶液检查Cl一除去效果，如有乳白色沉淀出现则继续浸泡。待Cr除去后，倒置过夜晾干。向硅胶平板中加入DM培养基2mL，置于37℃烘箱至无液体流动，在紫外灯下照射30min[Ⅻ。1．1．3LB培养基蛋白胨10g、NaC15g、酵母提取物5g、蒸