24.1水质急性毒性检测标准发光细菌法

中华人民共和国国家标准水质急性毒性的测定发光细菌法“a/T15441-1995Waterquality-Determinationoftheacutetoxicity-Luminescentbacteriatest1主题内容与适用范围1，主题内容本标准规定了测定水环境急性毒性的发光细菌法。1.2适用范围本标准适用于工业废水、纳污水体及实验室条件下可溶性化学物质的水质急性毒性监测。2方法提要基于发光细菌相对发光度与水样毒性组分总浓度呈显著负相关(P(0.05)，因而可通过生物发光光度计测定水样的相对发光度，以此表示其急性毒性水平。水质急性毒性水平按8所述条件选用相当的参比毒物氯化汞浓度(以mg/L为单位)来表征，或选用EC,。值(半数有效浓度—以样品液百分浓度为单位)来表征。3试荆和材料本标准所用试剂除另有说明外，均应为符合国家标准的分析纯试剂、蒸馏水或同等纯度的水。3.1氯化汞Hgcl3.2氯化钠NaCl，化学纯。3.3明亮发光杆菌T。小种(PhotobacteriumphosphoreumT,spp)冻干粉，安瓶瓶包装，每瓶0.5g，在2-5℃冰箱内有效保存期为6个月。新制备的发光细菌休眠细胞(冻干粉)密度不低于每克800万个细胞;当按6.2.4步骤将冻干粉复苏2min后即发光(可在暗室内检验，肉眼应见微光)，稀释成工作液后每毫升菌液不低于1.6万个细胞(5ml测试管)或2万个细胞(2ml测试管)(均为稀释平板法测定)。在毒性测试仪上测出的初始发光量应在600^-1900mV之间，低于600mV允许将倍率调至“X2”档，高于1900mV允许将倍率调至‘`X0.5”档。仍达不到标准者，更换冻干粉。3.4氯化钠溶液，3g/100ml,氯化钠3g于玻璃容器内，用量筒加蒸馏水100ml,3.5氯化钠溶液,2x/100ml,氯化钠2g，加蒸馏水100ml，于试剂瓶内，2^-5℃保存。3.6参比毒物氯化汞标准溶液。0.02,0.04,0.06,0.08,0.10,0.12,0.14,0.16,0.18,0.20,0.22,0.24mg/L,3.7氯化汞母液,p=2000mg/Lo万分之一分析天平精称密封保存良好的无结晶水氯化汞。氯化钠溶液稀释至刻度，置2-5℃冰箱备用，保存期6个月。国家环境保护局1995-03一25批准1000g入50ml容量瓶，用3g/100ml1995一08一01实施Gs/'r15441一19953.8氯化汞工作液，p=2mg/L,用移液管吸氯化汞2000mg/L母液10ml入1000ml容量瓶，用3g/100ml氯化钠溶液定容。再用移液管吸取氯化汞20mg/L液25ml入250ml容量瓶，用3g/100ml氯化钠溶液定容，将此液倒入配有半微量滴定管的试液瓶，然后，用3g/100ml氯化钠溶液将氯化汞2mg/L溶液按表1稀释成系列浓度(一律采用50ml容量瓶)。这些氯化汞稀释液保存期不超过24h，超过者务必重配。表1氯化汞工作溶液稀释配制系列(在50ml容量瓶中)加抓化汞(2mg/L)数,ml0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.0稀释定容后抓化汞浓度，mg/L0.020.040.060.080.100.120.140.160.180.200.220.244仪器4.1生物发光光度计。配置2或5ml测试管。当氯化汞标准溶液浓度为0.10mg/L时，发光细菌的相对发光度为50%，其误差不超过士lo%04.22ml或5ml测试样品管(具标准磨口塞，为制造比色管的玻璃料制作，由专业玻璃仪器厂制造)，分别适用于相应型号的生物发光光度计。4.3微量注射器:10pla4.4注射器:1ml,4.5定量加液瓶:5MI.4.6吸管:2,10,25ml,4.7试剂瓶;100ml,4.8量筒:100,500ml,4.9棕色容量瓶:50,250,1000ml,4.10半微量滴定管(配磨口试液瓶，全套仪器均为棕色),10MI.5样品5.1样品的采集和保存8.采样瓶使用带有聚四氟乙烯衬垫的玻璃瓶，务必清洁、干燥。采集水样时，瓶内应充满水祥不留空气。采样后，用塑胶带将瓶口密封。b.毒性测定应在采样后6h内进行。否则应在2-5℃下保存样品，但不得超过24h。报告中应写明水样采集时间和测定时间。c.对于含固体悬浮物的样品须离心或过滤去除，以免干扰测定。5.2样品液的稀释5.2.1样品液测定前稀释的条件5.2.1.1样品液预试验取事先加氯化钠至3g/100ml浓度的样品母液2ml装入样品管，并设一支CK管(氯化钠3g/100ml溶液)，按6所述测定相对发光度。5.2.1.2按5.2.1.1测得的样品，相对发光度低于50%乃至零，欲以ECso表达结果，则须稀释。5.2.1.3按5.2.1.1测得的样品，相对发光度在1%以上