考马斯亮兰G-250蛋白质定量测定法及其应用

考马斯亮兰G-250蛋白质定量测定法及其应用一叠醚经业速生鱼鱼望塾邀堂全丝考马斯亮兰�一�!蛋白质定量测定法及其应用第四军医大学刘嘉碱黄世岭综述王成济审校∀#了∃年%&∋()∗&(+‘∀首先建立了应用考马斯亮兰�一�!,−∗∗.∋//01%&0++∋23%+41�5�!,以下简称�一�!6定量测定蛋白质的比色法。该法简单、迅速、感度高、重复性好、千扰物质少,应用越来越广。近年来,对其作用原理有了进一步认识,方法上也有不少改进。本文拟就%7∋(加&(法及研究进展作一综述。一、�一�!与蛋白质的呈色原理810/5批9等闭提出�一�!的颜色变化是:;浓度的函数。−∗.<,∗2等∀∀根据�一�!溶液酸碱滴定时其可见光范围吸收光谱的变化,提出�一�!以三种形式存在,即阳离子、兼性离子和阴离子。:;:‘阴离子哥之兼性离子共井兰阳离子=:一=:5它们的最大吸收峰分别在>?!2.、∃=2.和#2.处,分别呈红色、绿色和兰色。加入蛋白质后≅#二增大、≅∃。。不变而≅ΑΒ。,二减小,提示蛋白质与染料阴离子结合后兰色加深。�一�!与蛋白质分子中的一Χ:吉经静电作用结合,使�一�!呈深兰色卜‘〕。这些一Χ:玄来自蛋白质的的Χ一末端氨基和碱性氨基酸残墓中氦基的质子化,因此碱性氨基酸残基对于�一�!与蛋白质的结合十分重要。玉米醇溶蛋白缺少赖氨酸和精氨酸,结合�一�!的能力只有牛血清白蛋白,%Δ≅6的∀Ε>。∀#??年Δ1(.∋Φ等工“且发现‘&9,,一种分子量为∀ΓΗ#的碱性肤6不与�一�!呈色,提出蛋白质与�一�!结合还涉及疏水作用。80Ι15川ϑ∃∀提出能与�一�!结合的肤最小为十五肤左右,疏水性氮基酸残基有利于蛋白质与�一�!的结合。≅Κ.∗(等ϑΛ+使用戊二醛修饰%Δ≅中?!Μ的游离氦瑟。修饰后的%Δ≅与�一�!的结合能力只减少∀!Μ。作者认为与�一�!结合的一Χ:左可能位于疏水凹陷部位,只有当�一�!牢固地结合在疏水部位后,它才有可能紧密地结合到一Χ:言上。上述实验表明蛋自质与�一�!结合需满足两个条件。一是蛋白质或多肤的大分子形式,即要超过一定分子量闭值,游离氨从酸和小肤不与�一�!呈色。二是蛋白质或多肤分子中有碱性基因或芬香族基因,‘之们分别通过静电作用或疏水作用与�一�!结合。疏水作用提供的结合力约占总结合力的ΓΜ。二、%&∋()∗&(测定方法%&∋()∗0(川介绍的方法如下。