第三章_高效液相色谱法

第三章_高效液相色谱法第三章第三章高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)高效液相色谱法：高效液相色谱法：特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。验技术建立的一种液相色谱分析法。高压：高压：150-350*105Pa高效：大于高效：大于30000塔板塔板/米高灵敏：高灵敏：10-9g（紫外检测）、（紫外检测）、10-11g（荧光检（荧光检测）测）§3-1高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点高效液相色谱法与经典液相色谱法高效液相色谱法与经典液相色谱法经典液相柱经典液相柱色谱装置色谱装置高效液相色谱仪高效液相色谱仪经典液相色谱经典液相色谱HPLC固定相粒径固定相粒径流动相驱动方式流动相驱动方式流动相流速流动相流速150-200μm重力或低压泵重力或低压泵很慢很慢3-10μm高压泵高压泵快(1-10mL/min)例：分离例：分离20种氨基酸种氨基酸柱长：柱长：170cm柱径：柱径：0.9cmF：30mL/ht分离分离:>20h经典柱色经典柱色谱HPLCt分离分离：1h一、HPLCHPLC与GCGC对比对比1．分析对象的区别分析对象的区别GC：适于能气化：适于能气化、热稳定性好热稳定性好、且沸点较且沸点较低的样品；但对高沸点低的样品；但对高沸点、挥发性差挥发性差、热稳定性差热稳定性差、离子型及高聚物的样离子型及高聚物的样品，尤其对大多数生化样品不可检测尤其对大多数生化样品不可检测占有机物的占有机物的20%HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品：适于溶解后能制成溶液的样品（包括包括有机介质溶液有机介质溶液），不受样品挥发性和不受样品挥发性和热稳定性的限制热稳定性的限制，对分子量大对分子量大、难气化气化、热稳定性差的生化样品及高分热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测子和离子型样品均可检测用途广泛用途广泛，占有机物的占有机物的80%2．流动相区别流动相区别GCGC：流动相为惰性：流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相有相互作用只与固定相有相互作用。HPLCHPLC：流动相为液