荷花SRAP_PCR反应体系的优化与确立_孙祖霞

荷花SRAP_PCR反应体系的优化与确立_孙祖霞南京农业大学学报2011，34(6):53－58JournalofNanjingAgriculturalUniversityhttp://nauxb．njau．edu．cn收稿日期:2011－06－09基金项目:国家公益性行业(农业)科研专项(200903020)作者简介:孙祖霞，硕士研究生。*通讯作者，刘兆磊，副教授，硕导，主要从事观赏植物种质资源与生物技术研究，E-mail:lzl@njau．edu．cn。孙祖霞，刘兆磊，陈素梅，等．荷花SRAP-PCR反应体系的优化与确立［J］．南京农业大学学报，2011，34(6):53－58荷花SRAP-PCR反应体系的优化与确立孙祖霞1，刘兆磊1*，陈素梅1，陈发棣1，楼望淮1，郭海林1，2(1．南京农业大学园艺学院，江苏南京210095;2．江苏省中国科学院植物研究所，江苏南京210014)摘要:以荷花(NelumbonuciferaGaertn)品种‘新红’叶片为材料，采用L16(45)正交试验设计，对SRAP-PCR反应体系中的Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物和模板DNA用量5因素进行了优化，并确立了适用于荷花SRAP-PCR的最佳反应体系。结果表明:荷花的SRAP-PCR最佳反应体系为:反应总体积10μL，包含2．0mmol·L－1Mg2+、300μmol·L－1dNTPs、0．5UTaqDNA聚合酶、4μmol·L－1上下游引物、50ngDNA及10×PCRBuffer。各因素水平变化对反应体系影响由大到小依次为:TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物、dNTPs、DNA。用48个荷花品种对优化的SRAP-PCR反应体系进行验证，均获得了条带清晰、多态性丰富的扩增图谱，证实了该体系的稳定性和适应性。关键词:荷花;SRAP-PCR;正交试验设计;反应体系优化中图分类号:S682．32文献标志码:A文章编号:1000－2030(2011)0